S1

UE :
Image et microscopie
(M1) |
Instrumentation en Imagerie moléculaire de la cellule |
Semestre
S3
| |
| | | | | | |
|ECTS : |COURS |TD |TP | |Total |
|3 |18 |8 h |8 h | |d'heures |
| | | | | |70 |
| | |
|Enseignant : |Module au choix : oui dans la |
|Corinne Schmitt-Keichinger, Maître de |mesure des places disponibles |
|Conférence, 65ème section, Institut de | |
|Biologie Moléculaire des Plantes, Tél 03 88 | |
|41 72 00 ; fax 03 88 61 44 42, Mail : | |
|corinne.keichinger@ibmp-ulp.u-strasbg.fr | |
|Pré-requis :.Notions de biologie cellulaire. Notions sur la théorie des ondes |
|OBJECTIFS DE L'ENSEIGNEMENT |
|Formation à la théorie et pratique de la microscopie photonique en transmission,|
|en épifluorescence, et des microscopies confocale et biphotonique |
|--------------------------------------------------------------------------------|
|--------------------------------------------------------------- |
|PROGRAMME DETAILLE : |
|I. Principes de base de la microscopie optique en lumière blanche et en |
|épifluorescence : |
|1. Description des éléments constitutifs d'un microscope droit ou inversé en |
|lumière blanche : l'éclairage, les objectifs et leurs propriétés, le |
|condenseur, les oculaires, la platine, le trajet optique. |
|2. Concept de grossissement, trajet optique et réglage de Koehler, formation de |
|l'image en microscopie |
|3. Les différents types d'observation en microscopie photonique |
|en lumière transmise : fond clair, fond noir, contraste de phase, lumière |
|polarisée, contraste interférentiel différentiel (DIC), épifluorescence. |
|II. Principes de base de la microscopie photonique en épifluorescence |
|1. Observations en épifluorescence : description des éléments constitutifs du |
|microscope en épifluorescence, éclairage, trajet optique, filtres et miroirs |
|dichroïques. |
|2. La fluorescence en microscopie : l'autofluorescence tissulaire en microscopie|
|à épifluorescence et confocale ; L' immunofluorescence en microscopie à |
|épifluorescence et confocale |
|III. Microscopie confocale, microscopie biphotonique et le FACS. |
|Description des éléments du microscope confocal ; éclairage, trajet optique, |
|miroirs dichroïques, pinhole, photomultiplicateur, formation de l'image, coupes |
|optiques et reconstruction tridimensionnelle |
|IV. Les systèmes d'acquisition d'images. |
|--------------------------------------------------------------------------------|
|--------------------------------------------------------------- |
|APPLICATIONS (TD ou TP) |
|TD : exercices sur les principes de la microscopie |
|TP : apprentissage de la manipulation des microscopes photoniques droits et |
|inversés, acquisition d'images numériques, |
|Visites : laboratoires disposant d'un microscope à effet confocal et |
|biphotonique. |
|--------------------------------------------------------------------------------|
|--------------------------------------------------------------- |
|CONFERENCES |
|--------------------------------------------------------------------------------|
|--------------------------------------------------------------- |
|COMPETENCES ACQUISES |
|A l'issue de cet enseignement, l'élève ingénieur aura : |
|- des connaissances solides sur les principes de tous les types de microscopie |
|photonique, |
|- appris à maîtriser le fonctionnement des microscopes photoniques classiques |
|(droits et inversés) et les principes d'acquisition des images. Il aura au cours|
|de démonstrations, appris le fonctionnement des microscopes confocal et |
|biphotonique. |
|--------------------------------------------------------------------------------|
|--------------------------------------------------------------- |
|Dispositif d'évaluation des enseignements et modalités d'examen : |
|Contrôle continu (1/2) et contrôle terminal (1/2) |
| |
| | | |
|UE : |Techniques d'Imagerie moléculaire de la |Semestre |
|Image et |cellule |S3 |
|microscopie | | |
|(M2) | | | | | | | | | |
|ECTS : |COURS |TD |TP |Projet |Total |
|3 |20 |14 h | | |d'heures |
| | | | | |60 |
| | |
|Enseignant : |Module au choix : oui dans la mesure|
|François Lasbennes, professeur, |des places disponibles |
|section 69 du CNU, Laboratoire de | |
|Neurophysiologie cellulaire et | |
|intégrée (UMR7519) Tel : 03 90 24 14| |
|57, Fax : 03 88 61 33 47 ; Mail : | |
|lasbenne@neurochem.u-strasbg.fr | |
|Pré-requis :.Notions de biologie cellulaire |
|OBJECTIFS DE L'ENSEIGNEMENT |
|Formation aux techniques de marquage moléculaire en microscopie |
|fonctionnelle |
|---------------------------------------------------------------------------|
|-------------------------------------------------------------------- |
|PROGRAMME DETAILLE : |
|I. Principes de base de la préparation des échantillons biologiques : |
|1. Fixation des échantillons, réalisation de coupes |
|2. Réalisation de cultures cellulaires, maintien en survie lors |
|d'observations en « time lapse » |
|II. Principes de base de la fluorescence : |
|1. Les fluorochromes; spectres d'excitation et d'émission des fluorochromes|
|et protéines autofluorescentes, caractéristiques chimiques et formation de |
|complexes, introduction dans les cellules, toxicité. |
|2. Les transferts d'énergie et techniques associées : fluorescence et |
|atténuation, luminescence, FRET, FLIM. |
|III. Colorations générales et spécifiques ex vivo |
|1 Colorations, marquage enzymatique |
|2 Techniques de marquage immunologique, coloration, fluorescence, marquages|
|multiples. Production des antigènes et des anticorps primaires, |
|caractérisation des sérums ; techniques de marquages, optimisation et |
|contrôles de spécificité. Applications : description de nombreux exemples |
|3 Marquage dans la cellule par formation de complexes moléculaires |
|spécifiques |
|IV Etudes fonctionnelles in vivo et in situ |
|1 Imagerie fonctionnelle : Calcium, potentiel membranaire, pH ... |
|2 Imagerie de l'expression des gènes (protéines de fusion) |
|3 Mouvements des organites intracellulaires |
|---------------------------------------------------------------------------|
|-------------------------------------------------------------------- |
|CONFERENCES |
|---------------------------------------------------------------------------|
|-------------------------------------------------------------------- |
|COMPETENCES ACQUISES |
|A l'issue de cet enseignement, les élèves devront être capables de |
|conseiller les expérimentateurs pour définir le choix des sondes les plus |
|appropriées