Numération des leucocytes dans le sang - bioltrop

| |
|Numération des leucocytes dans le sang |
| |
|Hématimètre de Thoma |
I. Prélèvement : .attendre au moins 2 heures après la fin d'un repas
.sang sur anticoagulant (EDTA ou héparine).
II. Le réactif de dilution : acide acétique à 0,5% | |
|Eau distillée . . . . . . . . . |
|. 100 ml |
|Acide acétique pur . . . . . . . |
|0,5 ml |
|Bleu de méthylène (facultatif). . . 25 |
|mg | Conservation : durée illimitée à température ambiante.
III. Le matériel nécessaire
.1 tube à hémolyse avec bouchon
.1 pipette automatique à volume règlable de 1 ml + embout
(à défaut : 1 pipette de 2 ml graduée au 1/10 ml)
.1 pipette automatique de 100 µl + embout
(à défaut 1 pipette de 100 µl à écoulement total)
.1 cellule de Thoma + 1 lamelle plane
.1 pipette Pasteur en verre
IV. Le contrôle de qualité La seule façon de procéder valablement est d'utiliser une suspension
globulaire du com-merce, la même suspension que celle qui sert pour le
contrôle et/ou l'étalonnage du dosage d'hémoglobine. Voir la technique
« Dosage de l'hémoglobine ». Idéalement un contrôle est effectué tous les jours. V. Mode opératoire
1. Diluer le sang au 1/20 On peut être amené à utiliser une dilution autre que 1/20 :
.en cas de leucopénie < 2.000/µl : diluer au 1/10 ou même 1/5
.en cas d'hyperleucocytose > 20.000/µl : diluer 1/40 ou même plus. Pour diluer au 1/20 : dans un tube à hémolyse introduire
successivement
| |
|Réactif de dilution . . . . . 1,9 |
|ml |
|Sang homogénéisé . . . . . 100 µl |
.Pratiquer plusieurs aspirations et refoulements à l'aide du mélange :
il ne doit pas
rester la moindre trace de sang sur la paroi de l'embout (ou de la
pipette) :.
.Boucher puis homogénéiser par retournements
.Attendre 2 à 5 minutes puis bien homogénéiser à nouveau
2. Avant de charger l'hématimètre de Thoma .Homogénéiser la dilution de sang contenue dans le tube
.Poser l'hématimètre sur une surface bien horizontale.
3. Introduire la dilution dans la cellule de Thoma .Charger les 2 compartiments (pour double comptage)
.Puis attendre au moins 5 minutes avant de commencer le comptage :
temps mini-
mum nécessaire pour que les leucocytes sédimentent.
4. Comptage : microscope objectif x 40 (objectif sec) | |
|On compte les leucocytes dans la totalité du quadrillage |
|volume = 0,1 µl. | Attention : Les érythroblastes -à la différence des hématies- ne sont pas
détruits par l'eau acétique ; ils sont donc comptés avec les leucocytes et
il faudra donc les déduire après examen du frottis sanguin coloré au MGG à
l'aide du calcul cité en annexe.
5. Calcul Soit n : nombre de leucocytes comptés (volume de 0,1 µl)
d : inverse de la dilution du sang
N : nombre de leucocytes par µl de sang | |
|N = n x 10 x d | Si sang dilué à 1/20 (d = 20)
N = n x 200 6. Le résultat à rendre : moyenne des 2 comptages. VI. Valeurs habituelles Chez l'adulte : 4.000 à 10.000/µl
.Plusieurs facteurs physiologiques peuvent faire varier ce nombre .Le résultat doit être accompagné d'une formule leucocytaire, dont les
résultats habituels
chez l'adulte sont les suivants : |Polynucléaires | |
|.neutrophiles |1.800* à 7.500 / µl |
|.éosinophiles |< 500 /µl |
|.basophiles |< 100 /µl |
| | |
|Lymphocytes |1.000 à 4.000 / µl |
|Monocytes |1.000 à 4.000 / µl | *Chez les Africains un nombre de polynucléaires neutrophiles situé entre
1.000 et 1.200 / µl est assez fréquent et ne doit pas être considéré a
priori comme pathologique.
Annexe : Calcul du nombre réel de leucocytes dans un sang qui contient des
érythroblastes
N = nombre de cellules nucléées comptées par µl (leuco + érythroblastes)
E% = nombre d'érythroblastes pour 100 leucocytes (déterminé sur frottis
MGG)
N' = nombre réel de leucocytes La formule à appliquer est la suivante : | |
|N' = 100 x N |
|100 + E% | Exemple : N = 13.240 / µl E% = 125 N' = 5.884
Le 17 juin 2008 Joseph Cuziat