TP99_sujet6.doc

TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES TRAVAUX PRATIQUES
SUJET 6
Durée : 7 heures Coefficient : 9
BIOCHIMIE
(8 points) Durée : 3 heures I. SEPARATION DES ACIDES AMINES D'UN MELANGE PAR CHROMATOGRAPHIE SUR
COUCHE MINCE. I.1. Matériel et réactifs - Cuve saturée par la phase mobile, constituée de : n-butanol,
propanone, acide éthanoïque, eau, dans des proportions 30-30-15-25.
- Plaques de gel de silice réactivée. - Solutions aqueuses témoins d'acides aminés : acide aspartique
(Asp), arginine (Arg), glycine (Gly), Proline (Pro) et tryptophane
(Trp). - Mélange d'acides aminés (X). I.2. Mode opératoire - Réaliser des dépôts, à 2 cm du bord inférieur, des solutions
témoins d'acides aminés et du mélange étudié.
- Placer la plaque dans la cuve. Laisser migrer. - Après séchage, révéler par pulvérisation ou par application au
pinceau de ninhydrine. Placer la plaque à l'étuve à 105°C, jusqu'à
apparition des taches. I.3. Résultats Calculer les Rf de chaque acide aminé et compléter le tableau de la feuille
de résultats. Identifier les acides aminés présents dans le mélange étudié. Laisser le chromatogramme sur le poste de travail. DOSAGE DU PHOSPHORE D'UNE EAU PAR LA METHODE DE BRIGGS.
II.1. Etalonnage du spectrophotomètre. A partir d'une solution étalon à 1 mmol de phosphore par L, préparer
une gamme de 5 tubes en respectant le protocole suivant : |Tubes |0 |1 |2 |3 |4 |
|Solution étalon |0 |0,2 |0,4 |0,6 |0,8 |
|(mL) | | | | | |
|Eau distillée (mL) |1 |0,8 |0,6 |0,4 |0,2 |
|Réactif molybdique |1 |
|(mL) | |
|Hydroquinone (mL) |1 |
|Sulfite de sodium |1 |
|(mL) | | Agiter. Laisser reposer 30 minutes. Lire l'absorbance à 700 nm contre le tube 0.
II.2. Dosage (2 essais E1 et E2). Traiter 1 mL de l'échantillon à doser dans les mêmes conditions et en
même temps que les tubes de la gamme. II.3. Résultats. Compléter le tableau de colorimétrie. Tracer sur papier millimétré la courbe d'étalonnage A = f(quantité de P en
µmol/tube). En déduire la concentration molaire en phosphore libre de l'eau analysée.
- A RENDRE AVEC LA COPIE
FEUILLE DE RESULTATS
CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE D'UN MELANGE D'ACIDES AMINES |Témoin |Asp |Arg |Gly |Pro |Trp | |Mélange |
|Rf | | | | | | | |
Composition du mélange :
DOSAGE DU PHOSPHORE LIBRE D'UNE EAU PAR LA METHODE DE BRIGGS
|Tubes n° |0 |1 |2 |3 |4 |E1 |E2 |
|Quantité de P | | | | | | | |
|en µmol/tube | | | | | | | |
|A lue à 700 nm| | | | | | | | Calcul de la concentration molaire en phosphore libre de l'eau analysée :
BAREME
BIOCHIMIE
(sur 20) I .Séparation des acides aminés d'un mélange par chromatographie sur couche
mince (6 points) - Chromatogramme 5 points
Calcul des Rf et identification des acides aminés 1 point - II . Dosage du phosphore libre d'une eau par la méthode de Briggs
(14 points) Tableau 1 point Tracé et présentation de la courbe (sur papier millimétré) 2 points Calcul de la concentration molaire 1 point Alignement des points 5 points Résultats Le meilleur 4 points ; le second 2 points
Ecart par rapport à la valeur attendue inférieur à 4 % : le maximum
Ecart supérieur à 8 % : zéro
SECURITE : pénalisation éventuelle de 1,2 ou 3 points en fonction des
fautes constatées.
QUALITE DES GESTES TECHNIQUES : Pénalisation éventuelle de 1,2 ou 3 points en fonction des fautes
constatées (utilisation correcte du matériel - appareils et verrerie -
organisation du travail, propreté de la paillasse...)
Si des pipettes automatiques sont utilisées elles seront systématiquement
réétalonnées avant l'examen par les responsables.