Protocoles_haiti - bioltrop

| |
|Micros 60 |
| |
|Mode d'utilisation simplifié |
[pic]
[pic]
[pic]
[pic] | |
|Réalisation d'un frottis sanguin | 1. Définitions
Un frottis est un étalement de cellules sur une lame de verre observable au
microscope (ex : frottis cervico-vaginal, frottis sanguin).
Un frottis est une technique de préparation et non son analyse. Un frottis
sanguin permet de réaliser un hémogramme.
2. Principe
La réalisation d'un frottis sanguin consiste à obtenir, sur une lame de
verre, une couche unicellulaire d'éléments figurés du sang répartis sur
tout le frottis et fixés dans l'aspect le plus proche de l'état
physiologique.
3. Matériel
La réalisation d'un frottis sanguin nécessite : . une lame de verre propre, dégraissée et sèche
. une lamelle d'étirement : lamelle épaisse, plus étroite que les lames,
à bords lisses ou à défaut une autre lame de verre propre
. un tube contenant du sang capillaire ou veineux prélevé sur EDTA sec
. un capillaire d'hématocrite ou une pipette
. une paire de gants pour risque biologique
. un conteneur pour DASRI (déchets d'activité de soins à risques
infectieux)
4. Technique
. Déposer une goutte de sang à 1 cm du bord droit de la lame de verre posée
horizontalement sur la paillasse : goutte de sang . Placer le bord de la lamelle d'étirement en contact avec la lame à gauche
de la goutte : lamelle d'étirement ou autre
lame . Faire glisser la lamelle inclinée de 45°, de gauche à droite, vers la
goutte de sang jusqu'à la toucher.
Laisser le sang se répartir de façon homogène sur toute la largeur de la
lamelle d'étirement.
adhésion du sang sur la lamelle
. Pousser la lamelle d'un mouvement rapide et régulier, de droite à gauche,
en maintenant la même inclinaison. . Sécher le frottis par déshydratation à température ambiante.
. Identifier le frottis.
. Nettoyer la lamelle d'étirement avec un papier imbibé de détergent si une
série de frottis doit être
réalisée.
. Eliminer les déchets souillés de sang dans le conteneur à DASRI.
. Recycler les lames des frottis non conformes dans un bac contenant du
détergent ainsi que la lamelle
d'étirement. 5. Résultats 5.1. Critères d'un bon frottis
[pic] 5.2. Causes d'erreurs [pic]
| |
|Etude des cellules sanguines sur frottis sanguin colorés |
1. Étude morphologique des hématies
Cette étude consiste en l'examen des hématies dans une zone où elles sont
bien séparées et non déformées par l'étalement (en général vers la fin du
frottis).
Cette étude complète les données de l'hémogramme permettant le dépistage
éventuel d'anomalies morphologiques orientant le diagnostic des anémies. La population érythrocytaire normale est homogène, ce qui peut s'apprécier
d'après 3 critères : . la forme : disques biconcaves se présentant sur les frottis sur leur
face arrondie.
. la taille : s'écartant très peu du diamètre moyen de 7,2 ?m. . la coloration : liée au contenu en hémoglobine, éventuellement
variable d'une lame à l'autre, mais
sur une même lame toutes les hématies doivent avoir la même coloration avec
une petite dépression centrale correspondant à la partie moins épaisse
(concave). Toute population érythrocytaire qui ne correspond pas à ces 3 critères est
pathologique et les anomalies seront classées selon ces critères. 1. Anomalies de forme
Anomalies assez spécifiques de certains types d'anémies : - sphérocyte : hématie de petit diamètre (< 6 ?m), dont l'épaisseur est
d'environ 3 ?m, mais dont le volume est normal : elle est biconvexe et se
rapproche de la forme sphérique (anomalie de l'ankirine). Sur frottis
coloré au MGG, il apparaît plus petit (microcyte) et fortement coloré
(hyperchrome) ; l'hyperchromie s'explique par l'absence de dépression
centrale car VGM et CCMH sont normaux. - ovalocyte ou elliptocyte : hématie de forme ovalaire, allongée (anomalie
de la spectrine) de volume diminué (VGM < 50 à 70 ?m3). Il peut apparaître
légèrement hyperchrome.
- drépanocyte : hématie falciforme (en faucille), allongée aux extrémités
pointues. Sa longueur varie de 10 à 20 ?m et sa largeur de 2 à 4 ?m. Il
renferme de l'hémoglobine anormale : HbS. Anomalies moins spécifiques et pouvant se voir dans différents types
d'anémies : - schizocytes : fragments d'hématies caractérisant des formes rares
d'anémie par
hémolyse mécanique - poïkilocytes : mélange d'hématies de formes variées, aberrantes (forme de
poire, de
massue, de raquette avec des contours irréguliers) - cellule-cible ou codocyte , particulièrement fréquentes dans les
thalassémies - acanthocyte : hématie crénelée, rencontrée dans une maladie héréditaire
caractérisée par l'absence de ß-lipoprotéines. 2. Anomalies de taille
Elles concernent le diamètre et l'épaisseur de l'hématie qui peuvent varier
ainsi que le volume qui en dépend. On distingue :
1. Macrocytes ou mégalocytes
Leur diamètre est supérieur à la normale (8 à 10 ?m), l'épaisseur et le
volume également (VGM > 100 ?m3). La cellule garde sa forme normale car le
rapport de l'épaisseur et du diamètre est conservé.
Certains macrocytes plus volumineux (12 à 15 ?m) sont des mégalocytes:
hématies anormales observées lors de carence en vitamine B12 (cobalamine)
ou en folates (vitamines B9) ; le mégalocyte sur frottis ne présente pas de
dépression centrale, son épaisseur étant très augmentée. 2. Microcytes
Toutes les dimensions de l'hématie sont diminuées, mais la forme biconcave
est conservée.
Au cours d'une anémie microcytaire, la forme hypochromique est fréquente
(TCMH et/ou CCMH inférieures à la normale). 3. Anisocytose
Ce terme désigne la présence simultanée dans le sang d'hématies de diverses
tailles. 3. Anomalies de coloration
On distingue : . hypochromie : cas d'hématies de teinte plus pâle, pauvres en
hémoglobine (CCMH
abaissée), souvent microcytaires (VGM abaissé) . hyperchromie : terme impropre ; l'hématie étant normalement saturée en
Hb, la CCMH ne
peut être augmentée. Ce terme désigne les hématies de teinte plus foncée
que la normale (macrocyte ou sphérocyte). . anisochromie : terme désignant la présence simultanée dans le sang
d'hématies d'intensité de coloration variable. 4. Anomalies d'évolution
On distingue : . corps de Jolly : inclusion d'environ 1 ?m, colorée en violet sur
frottis au MGG (restes
nucléaires). Présence dans le sang même en petite quantité est pathologique
(anémie grave). . anneau de Cabot : fin élément érythrocytaire ayant la forme d'un
anneau, d'un huit ou d'une raquette, coloré en rouge violacé (restes
d'enveloppe nucléaire ou de fuseau mitotique ? observé en cas
d'anémies graves)
. hématie ponctuée : hématie avec des granulations arrondies et
basophiles (condensation anormale de ribosomes, anomalie dans la
synthèse d'Hb, anémie au plomb notamment) . hématie polychromatophile : hématie de teinte rose-gris qui est un
réticulocyte (voir coloration au bleu de crésyl brillant). La morphologie des érythrocytes doit être analysée pour tout hémogramme.
Lorsqu'elle n'est pas précisée dans la réponse c'est en général qu'elle est
normale. Toute anomalie doit être mentionnée et son importance précisée
(appréciation qualitative : + si elle est minime, à +++ si elle est très
marquée).
2. Étude morphologique des thrombocytes
L'étude morphologique de thrombocytes sur frottis sanguin coloré montre : . des agrégats plaquettaires si le prélèvement est capillaire
. des plaquettes petites et isolées si le prélèvement est veineux sur
anticoagulant (EDTA)
Elle peut détecter des anomalies plaquettaires, rares, et nécessitant
l'étude des fonctions plaquettaires. En pratique, ce sont les anomalies
quantitatives des plaquettes qui sont de loin les plus fréquentes. 3. Étude morphologique des leucocytes
Contrairement aux hématies, la population leucocytaire est très hétérogène,
rassemblant des cellules fonctionnellement et morphologiquement très
différentes. La formule leucocytaire fait le décompte de cette hétérogénéité. Elle se
fait soit sur frottis au microscope soit sur des appareils automatiques. La
formule obtenue à l'aide des automates ne concerne que les éléments
normaux. Dès que des éléments anormaux sont détectés, l'automate génère des
alarmes spécifiques du type d'anomalie, ce qui conduit à faire un étalement
(manuel ou par l'automate) pour établir la formule leucocytaire sur une
lame colorée et observée au microscope. Le résultat du décompte est exprimé en pourcentage, mais les valeurs de
référence pour apprécier les anomalies pathologiques doivent être les taux
en valeur absolue de cellules circulantes par unité de volume. Ils se
calculent en multipliant le pourcentage de chaque catégorie leucocytaire
par la numération leucocytaire.
|Lignée |Variation |Nom |Exemples d'étiologie|
|Polynucléaires |Augmentation > 8G/L |Polynucléose |Inflammation, |
|neutrophiles | | |infection |
| | | |bactérienne |
| |Diminution 0,5 - 1 |Neutropénie |Allergie |
| |G/L | |médicamenteu